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专注多肽 服务科研
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来自人类流感血凝素 (HA) 的由九个氨基酸组成的多肽。HA Peptide 广泛用于细胞生物学和生物化学中分离，纯化，检测和追踪目标蛋白。
编号：131083
CAS号：92000-76-5
单字母：H2N-YPYDVPDYA-OH
HA源于流感病毒红细胞凝集素表面抗原决定簇对目标蛋白的空间结构影响小。
HA Peptide (HA tag) 是来自人类流感血凝素 (HA) 的由九个氨基酸组成的多肽。HA Peptide 广泛用于细胞生物学和生物化学中分离，纯化，检测和追踪目标蛋白。
HA Peptide (HA tag) is a nine amino acids peptide derived from the human influenza hemagglutinin (HA). HA Peptide is extensively used to isolate, purify, detect, and track the protein of interest in cell biology and biochemistry.
HA标签复合体由质粒DNA、转铁蛋白 - 聚赖氨酸和流感病毒血凝素HA-2亚基N端序列衍生的聚赖氨酸共轭肽共同组成，用于将荧光素酶或β-半乳糖苷酶标记的基因转移进K562细胞、HeLa细胞和BNL CL.2肝细胞。DNA复合体中HA共轭多肽的存在使得该复合体可以破坏膜结构，使转铁蛋白 - 聚赖氨酸介导基因转移进入细胞[1]。
在流感病毒中，血凝素（HA）蛋白介导病毒与细胞表面的结合以及随后的病毒与细胞膜的融合。HA由受体结合亚单位HA1和膜融合亚单位HA2组成。病毒表面存在的HA1yHA2复合体是无活性的，膜融合是由HA蛋白的构象状态所调控的。当细胞内体处于酸性环境时，HA蛋白从天然构象（非膜融合）转换成融合活性（膜融合）的构象。HA的天然结构处于一种亚稳定的状态，对天然结构进行去稳定化后得到膜融合构象[2]。
HA标签、含有质粒DNA的复合物、转铁蛋白-聚赖氨酸偶联物以及源自流感病毒血凝素亚基HA-2 N端序列的聚赖氨酸偶联肽，已被用于将萤光素酶或半乳糖苷酶标记基因转移至K562细胞、HeLa细胞和BNL CL.2肝细胞。在脂质体泄漏试验中，这些流感肽偶联物在DNA复合物中的存在使复合物在膜破坏方面具有活性，并显著增强了转铁蛋白-聚赖氨酸介导的基因转移。
HA tag,Complexes containing plasmid DNA, transferrin-polylysine conjugates, and polylysine-conjugated peptides derived from the N-terminal sequence of the influenza virus hemagglutinin subunit HA-2 have been used for the transfer of luciferase or -galactosidase marker genes to K562 cells, HeLa cells, and BNL CL.2 hepatocytes. The presence of these influenza peptide conjugates in the DNA complexes renders the complexes active in membrane disruption in a liposome leakage assay and results in a substantial augmentation of the transferrin-polylysine-mediated gene transfer.
来源于流感病毒血凝素亚基HA-2 N端序列的促融合肽是DNA复合物的一部分，可增强向培养细胞的基因转移效果1。
Fusogenic peptides derived from the N-terminal sequence of the influenza virus hemagglutinin subunit HA-2 is part of the DNA complexes and the resulting augmentation of gene transfer to cultured cells1.
在流感病毒中，血凝素（HA）蛋白既介导病毒与细胞表面的结合，也介导病毒膜与细胞膜的后续融合。HA由一个受体结合亚基（称为HA1）和一个促融合亚基（称为HA2）组成。天然HA1yHA2复合物（存在于天然病毒表面）是无融合活性的。对于流感病毒而言，膜融合受血凝素（HA）蛋白构象状态的调控，当暴露于细胞内涵体的酸性环境中时，该蛋白会从天然（非促融合）结构转变为融合活性（促融合）构象。HA的天然结构被困在亚稳态中，而促融合构象则通过破坏天然结构的稳定性而释放出来[2]。
In the influenza virus, the hemagglutinin (HA) protein mediates both binding of the virus to the cell surface and the subsequent fusion of viral and cellular membranes. HA is composed of a receptor-binding subunit, denoted HA1, and a fusogenic subunit, denoted HA2. The native HA1yHA2 complex, as found on the surface of the native virus, is fusioninactive. For influenza virus, membrane fusion is regulated by the conformational state of the hemagglutinin (HA) protein, which switches from a native (nonfusogenic) structure to a fusion-active (fusogenic) conformation when exposed to the acidic environment of the cellular endosome. The native structure of HA is trapped in a metastable state and that the fusogenic conformation is released by destabilization of native structure2.
References:
1. E. WAGNER, C. PLANK et al, Influenza virus hemagglutinin HA-2 N-terminal fusogenic peptides augment gene transfer by transferrin-polylysine-DNA complexes: Toward a synthetic virus-like gene-transfer vehicle. Proc. Nati. Acad. Sci. USA Vol. 89, pp. 7934-7938, September 1992
2. C. M. CARR, C. CHAUDHRY, P. S. KIM et al. Influenza hemagglutinin is spring-loaded by a metastable native conformation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA Vol. 94, pp. 14306–14313
Haptens are small-molecule drugs that bind to the toll-like receptor. Haptens can be used as a vaccine adjuvant and have been shown to be effective in the prevention of pandemic influenza. Haptens also inhibit viral replication by binding to surface glycoproteins, which prevents them from attaching to host cells. This process triggers the production of reactive oxygen species (ROS) and other inflammatory cytokines, which ultimately result in significant cytotoxicity. Haptens are capable of transferring immune responses from one animal to another, but this transfer is not always successful due to the basic protein structure of haptens.
专肽生物可以提供常见抗体制备、免疫学研究等生物科研需求的各类标签多肽（Tag peptide）以及蛋白底物产品，可用荧光标记(FITC、5-Fam)等。除常见抗体中抗原决定部位的标签多肽（tag: His | c-Myc | HA | FLAG | V5 | X-press | VSV tag | T7 tag | Snoop tag | E-tag | Sof tag 1 | Spy tag |等等），我们还提供各类定制标签肽的合成，并可提供荧光标记(FITC、5-Fam)等。同时，免费提供的MS和HPLC分析报告。
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1155/2013/581093 | Several affinity tags commonly used in chromatographic purification | 下载 |
| 10.1007/s10529-012-0966-8 | A new idea for simple and rapid monitoring of gene expression: requirement of nucleotide sequences encoding an N-terminal HA tag in the T7 promoter-driven expression in E. coli | 下载 |
| 10.1038/nmeth0207-107 | The HA tag is cleaved and loses immunoreactivity during apoptosis | 下载 |
| 10.1007/s00784-018-2701-x | A novel hydroxyapatite-binding antimicrobial peptide against oral biofilms | 下载 |
| 10.1021/acs.langmuir.9b03856 | Zwitterionic Peptide Enhances Protein-Resistant Performance of Hyaluronic Acid-Modified Surfaces | 下载 |
| 10.1002/jbm.b.32648 | Surface immobilization of MEPE peptide onto HA/β-TCP ceramic particles enhances bone regeneration and remodeling | 下载 |
| 10.1016/j.matbio.2018.01.021 | Design of peptide mimetics to block pro-inflammatory functions of HA fragments | 下载 |
| 10.1016/j.bmc.2021.116132 | Amphiphilic peptide-based MMP3 inhibitors for intra-articular treatment of knee OA | 下载 |
多肽H2N-Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala-COOH的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取2.3g CTC Resin（如初始取代度约为0.58mmol/g）和1.6mmol Fmoc-Ala-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入4.0mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Ala-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Ala-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取4.0mmol Fmoc-Tyr(tBu)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入8.0mmol DIPEA，3.8mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
H2N-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
H2N-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
H2N-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Pro-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
H2N-Pro-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Pro-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Tyr(tBu)-Pro-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin，结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
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