载脂蛋白 E (Apolipoprotein E, APOE) 肽的片段，与 ApoE 全息蛋白竞争结合 LDL 受体，具有有效的抗炎和神经保护作用。
编号：200724
CAS号：514200-66-9/2763583-75-9/2828432-37-5
单字母：Ac-LRVRLASHLRKLRKRLL-CONH2
COG 133 TFA 是载脂蛋白 E (Apolipoprotein E, APOE) 肽的片段。COG 133 与 ApoE 全息蛋白竞争结合 LDL 受体，具有有效的抗炎和神经保护作用。COG 133 TFA 也是 nAChR 拮抗剂，IC50 为 445 nM。
COG 133 TFA is a fragment of Apolipoprotein E (APOE) peptide. COG 133 TFA competes with the ApoE holoprotein for binding the LDL receptor, with potent anti-inflammatory and neuroprotective effects. COG 133 TFA is also a nAChR antagonist with an IC50 of 445 nM[1][2].
COG133是载脂蛋白E（APOE）肽的片段，具有强大的抗炎和神经保护作用。COG 133也是nAChR拮抗剂，其IC50为445nM。COG133（0.02、0.2和2.0μM）改善了无谷氨酰胺培养基中的细胞数量。在IEC-6细胞中，COG133（0.2-20μM）改善了5-FU激发后的细胞迁移，达到了与对照组相同的迁移水平。COG133（3μM）显著增加C57BL6J野生型动物的有丝分裂隐窝数量。COG133治疗改善了隐窝结构并减少了固有层炎症。COG133（3μM）可显著降低肠道MPO水平。COG133部分降低5-FU处理小鼠近端小肠的TNF-α水平。在野生型和ApoE敲除小鼠中，COG 133（3μM）逆转了5-FU诱导的近端肠中Tunel阳性细胞的增加。COG133在改善的肠粘膜中引起NF-κB的高表达。
COG 133 is a fragment of Apolipoprotein E (APOE) peptide with potent anti-inflammatory and neuroprotective effects. COG 133 is also a nAChR antagonist with an IC50 of 445 nM. COG 133 (0.02, 0.2, and 2.0 μM) improved cell numbers in glutamine free media. In IEC-6 cells, COG 133 (0.2-20 μM) improved cell migration following 5-FU challenge, reaching the same migration level as controls. COG 133 (3 μM) significantly increased the mitotic crypt numbers in C57BL6J wild-type animals. COG 133 treatment improved crypt architecture and reduced lamina propria inflammation. COG 133 (3 μM) significantly reduced the intestinal MPO levels. COG 133 partially decreased TNF-α level in the proximal small intestine from 5-FU-treated mice. In both wild-type and ApoE knock-out mice, COG 133 (3 μM) reverted the increase in Tunel-positive cells in the proximal intestine induced by 5-FU. COG 133 caused higher expression of the NF-κB in the improved intestinal mucosa.
COG 133的化学式为C97H181N37O19，氨基酸序列为Ac-Leu-Arg-Val-Arg-Leu-Ala-Ser-His-Leu-Arg-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Leu-Leu-amide，分子量为2169.73。载脂蛋白E（ApoE）含有299个氨基酸，它参与运输脂蛋白、脂溶性维生素和胆固醇进入淋巴系统，然后进入血液。它主要在肝脏中合成，但在其它组织如脑、肾和脾也有发现。载脂蛋白E主要产生于神经系统、非神经元细胞以及星形胶质细胞和小胶质细胞，神经元优先表达APOE的受体。目前鉴定得到了哺乳动物的七种APOE受体，APOE受体属于低密度脂蛋白受体家族，进化上相对保守。最初发现APOE是因其在脂蛋白代谢和心血管疾病中的重要性。APOE缺陷导致家族性血β脂蛋白异常，又称Ⅲ型高脂蛋白血症（HLP III），其中乳糜微粒、极低密度脂蛋白和低密度脂蛋白的残余物清除受损，造成血浆胆固醇和甘油三酯增加。最近研究了其在与脂蛋白运输没有直接关系的生物学过程中的作用，包括阿尔兹海默症（AD）、免疫调节和认知。
COG 133 acetate is a fragment of ApoE that exhibits anti-inflammatory and neuroprotective effects and could also be an antagonist at α7 nicotinic acetylcholine receptors.
COG 133醋酸盐是ApoE的一个片段，具有抗炎和神经保护作用，也可能是α7烟碱型乙酰胆碱受体的拮抗剂。
COG133 is a peptide fragment of ApoE that corresponds to residues 133-149 of the ApoE LDL receptor-binding domain and an antagonist of α7 nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs; IC50 = 720 nM). It suppresses TNF-α and nitric oxide (NO) release in BV-2 microglia when used at concentrations ranging from 10 to 50 µM.
COG133是ApoE的肽片段，其对应于ApoE LDL受体结合结构域的残基133-149，并且是α7烟碱型乙酰胆碱受体（nAChRs；IC50=720nM）的拮抗剂。当浓度为10至50µM时，它可以抑制BV-2小胶质细胞中TNF-α和一氧化氮（NO）的释放。
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1186/1471-230X-12-35 | Apolipoprotein E COG 133 mimetic peptide improves 5-fluorouracil-induced intestinal mucositis | 下载 |
| 10.1124/jpet.105.095505 | Apolipoprotein E-derived peptides block alpha7 neuronal nicotinic acetylcholine receptors expressed in xenopus oocytes | 下载 |
| 10.1172/jci.insight.134539 | Monocyte-derived alveolar macrophage apolipoprotein E participates in pulmonary fibrosis resolution | 下载 |
多肽Ac-Leu-Arg-Val-Arg-Leu-Ala-Ser-His-Leu-Arg-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Leu-Leu-NH2的合成步骤：
1、合成MBHA树脂：取若干克MBHA树脂（如初始取代度为0.5mmol/g）和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中，加入DMF，搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA，搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU，搅拌混合均匀。反应3-4小时后，用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上，得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图：
2、脱Fmoc：取2.62g的上述树脂，用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取2.36mmol Fmoc-Leu-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入4.72mmol DIPEA，2.24mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Leu-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Leu-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin，结构如下：
5、乙酸酐反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入2.36mmol乙酸酐到树脂中，再加入4.72mmol DIPEA，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到Ac-Leu-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHAResin。 结构如下：
6、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品Ac-Leu-Arg-Val-Arg-Leu-Ala-Ser-His-Leu-Arg-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Leu-Leu-NH2。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
7、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
8、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。
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