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VKGILS-NH2 是一种 SLIGKV-NH2 (蛋白酶激活的受体 2 (PAR2) 的激动剂) 的反向氨基酸序列对照肽，对细胞中的 DNA 合成没有影响。
VKGILS-NH2 is a reversed amino acid sequence control peptide for SLIGKV-NH2 (protease-activated receptor 2 (PAR2) agonist). VKGILS-NH2 has no effect on DNA synthesis in cells.

VKGILS-NH2是蛋白酶激活受体2（PAR2）激动剂SLIGKV-NH2的反向氨基酸序列对照肽。PARs是一组存在于几种细胞类型中的G蛋白偶联受体。目前，包括PAR1到4在内的四种PAR成员已被识别、克隆及指定。PAR2在呼吸道和胃肠道表达。PAR2活化与各种细胞和组织内的炎症反应密切相关。经鉴定，PAR2可诱导蛋白酶激活，因此导致全身性低血压。

体外实验：将PAR2激活肽AP(SLIGKV-NH2)和反向对照肽RP(VKGILS-NH2)用于一项研究，以揭示PAR2是通过人体内支气管上皮细胞，轻度增强粘蛋白分泌。根据这项研究，与VKGILS-NH2处理的细胞相比，细胞暴露于合成的100和1000 M浓度的PAR2激动肽(SLIGKV-NH2)30分钟可导致粘蛋白分泌微弱但统计上显着的增加。

体内实验：在一项体内研究中，将在最高浓度不会引起收缩反应的小鼠PAR2反向(LRGILS-NH2)和人类PAR2反向(VKGILS-NH2)肽作为对照，以验证在豚鼠胆囊中，PAR1和PAR2活化可引起收缩反应。

临床试验：合成PAR2激活肽SLIGKV-NH2及其反向序列对照肽VKGILS-NH2，以验证人体内PAR2活化可引发血管舒张的假设。该项研究结果表明，在前臂阻力血管中，SLIGKV-NH2引发剂量依赖性扩张，而VKGILS-NH2没有显著效果。

H-Val-Lys-Gly-Ile-Leu-Ser-NH2 is a biologically active peptide. It is a peptide that is derived from the amino acid sequence of protease activated receptor 2 (PAR2) and has been shown to induce coagulation. This peptide has also been shown to have cardiovascular effects, such as reducing blood pressure, and may be useful in the treatment of hypertension.

M Tognetto, et al. Evidence That PAR-1 and PAR-2 Mediate Prostanoid-Dependent Contraction in Isolated Guinea-Pig Gallbladder. Br J Pharmacol. 2000 Oct;131(4):689-94. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11030717
David A Vesey, et al. Proinflammatory and Proliferative Responses of Human Proximal Tubule Cells to PAR-2 Activation. Am J Physiol Renal Physiol. 2007 Nov;293(5):F1441-9. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17699557

多肽H2N-Val-Lys-Gly-Ile-Leu-Ser-NH2的合成步骤：

1、合成MBHA树脂：取若干克的MBHA树脂（如初始取代度为0.5mmol/g）和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中，加入DMF，搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA，搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU，搅拌混合均匀。反应3-4小时后，用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上，得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图：

2、脱Fmoc：取1.4g的上述树脂，用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：

3、缩合：取1.26mmol Fmoc-Ser(tBu)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入2.52mmol DIPEA，1.2mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：

4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到

H2N-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Lys(Boc)-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin

H2N-Lys(Boc)-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Val-Lys(Boc)-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin

以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。

最后再经过步骤二得到 H2N-Val-Lys(Boc)-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin，结构如下：

5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Val-Lys-Gly-Ile-Leu-Ser-NH2。结构图见产品结构图。

切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）

6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

7、最后总结：

杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽

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