用于测定胱天蛋白酶-1（ICE）和胱天蛋白酶1样酶活性的特异性高荧光FRET底物。
编号：193106
CAS号：189696-01-3
单字母：Mca-YVADAP-K(Dnp)-OH
| 编号: | 193106 |
| 中文名称: | 七肽Mca-YVADAP-K(Dnp) |
| 英文名: | Mca- YVADAPK(Dnp) |
| CAS号: | 189696-01-3 |
| 单字母: | Mca-YVADAP-K(Dnp)-OH |
| 三字母: | MCA Mca、7-甲氧基香豆素-4-乙酸修饰 -TyrL-酪氨酸：tyrosine。系统命名为(2S)-氨基-3-(4-羟基苯基)丙酸。是编码氨基酸。符号：Y，Tyr。 -ValL-缬氨酸：valine。系统命名为(2S)-氨基-3-甲基丁酸。是编码氨基酸。是哺乳动物的必需氨基酸。符号：V，Val。在某些放线菌素如缬霉素中存在 D-缬氨酸。 -Ala丙氨酸：alanine。L-丙氨酸的系统命名为(2S)-氨基丙酸，是编码氨基酸，也叫L-α-丙氨酸。符号：A，Ala。D-丙氨酸存在于多种细菌细胞壁的糖肽中。β-丙氨酸是维生素泛酸和辅酶A的组分。 -AspL-天冬氨酸：aspartic acid。系统命名为(2S)-氨基-丁二酸。是编码氨基酸，又是神经递质。符号：D，Asp。D-天冬氨酸存在于多种细菌的细胞壁和短杆菌肽A中。 -Ala丙氨酸：alanine。L-丙氨酸的系统命名为(2S)-氨基丙酸，是编码氨基酸，也叫L-α-丙氨酸。符号：A，Ala。D-丙氨酸存在于多种细菌细胞壁的糖肽中。β-丙氨酸是维生素泛酸和辅酶A的组分。 -ProL-脯氨酸：proline。系统命名为吡咯烷-(2S)-羧酸。为亚氨基酸。是编码氨基酸。在肽链中有特殊作用，如易形成顺式的肽键等。符号：P，Pro。 -Lys(Dnp)侧链Dnp保护的赖氨酸 -OHC端羧基：C-terminal carboxyl group。在肽或多肽链中含有游离羧基的氨基酸一端。在表示氨基酸序列时，通常将C端放在肽链的右边。 |
| 氨基酸个数: | 7 |
| 分子式: | C53H64O19N10 |
| 平均分子量: | 1145.13 |
| 精确分子量: | 1144.43 |
| 等电点(PI): | 7.01 |
| pH=7.0时的净电荷数: | - |
| 平均亲水性: | -0.58 |
| 疏水性值: | 0.3 |
| 外观与性状: | 白色粉末状固体 |
| 消光系数: | 1490 |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 纯度: | 95%、98% |
| 盐体系: | 可选TFA、HAc、HCl |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | 侧链保护基肽 |
Specific highly fluorescent FRET substrate for the determination of caspase-1 (ICE) and caspase-1-like enzyme activities. Cleavage of Mca-YVADAPK(Dnp) at the P1 Asp residue results in a continuous fluorescent assay monitored at an emission wavelength of 392 nm. Caspase-3 (apopain, CPP-32) is only weakly active on this substrate. Both caspase-1 and caspase-3 are involved in apoptosis. A specific substrate for renal ACE 2.
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1074/jbc.M200581200 | Hydrolysis of biological peptides by human angiotensin-converting enzyme-related carboxypeptidase | 下载 |
| 10.1186/2042-6410-1-6 | Sex differences in renal angiotensin converting enzyme 2 (ACE2) activity are 17β-oestradiol-dependent and sex chromosome-independent | 下载 |
| 10.1074/jbc.M112.380816 | Sizzled is unique among secreted frizzled-related proteins for its ability to specifically inhibit bone morphogenetic protein-1 (BMP-1)/tolloid-like proteinases | 下载 |
| 10.1038/380723a0 | Sequential activation of ICE-like and CPP32-like proteases during Fas-mediated apoptosis | 下载 |
| 10.1074/jbc.M109.086447 | Role of the netrin-like domain of procollagen C-proteinase enhancer-1 in the control of metalloproteinase activity | 下载 |
多肽MCA-Tyr-Val-Ala-Asp-Ala-Pro-Lys(Dnp)-COOH的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取1.17g CTC Resin（如初始取代度约为1.17mmol/g）和1.64mmol Fmoc-Lys(Dnp)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入4.11mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Lys(Dnp)-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Lys(Dnp)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取4.11mmol Fmoc-Pro-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入8.21mmol DIPEA，3.9mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin
Fmoc-Ala-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin
H2N-Ala-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Ala-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Ala-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin
Fmoc-Ala-Asp(OtBu)-Ala-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin
H2N-Ala-Asp(OtBu)-Ala-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin
Fmoc-Val-Ala-Asp(OtBu)-Ala-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin
H2N-Val-Ala-Asp(OtBu)-Ala-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Val-Ala-Asp(OtBu)-Ala-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Tyr(tBu)-Val-Ala-Asp(OtBu)-Ala-Pro-Lys(Dnp)-CTC Resin，结构如下：
5、7-甲氧基香豆素-4-乙酸(MCA)反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入4.11mmol 7-甲氧基香豆素-4-乙酸(MCA)到树脂中，再加入8.21mmol DIPEA、3.9mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到MCA-Tyr(tBu)-Val-Ala-Asp(OtBu)-Ala-Pro-Lys(Dnp)-CTCResin。 结构如下：
6、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品MCA-Tyr-Val-Ala-Asp-Ala-Pro-Lys(Dnp)-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
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