白细胞介素-2(IL-2)是免疫系统的细胞因子信号分子,调节白细胞(淋巴细胞)的活性,对免疫应答具有重要作用。
编号:138617
CAS号:
单字母:H2N-LTFKFYMPKKA-OH
白细胞介素II(60-70),化学式为C68H104N14O14S,氨基酸序列NH2 LEU-THR-PHE-LYS-PHE-TYR-MET-PRO-LYS-LYS-ALA-COOH,分子量为1373.7。白细胞介素-2(IL-2)是免疫系统的细胞因子信号分子,调节白细胞(淋巴细胞)的活性,对免疫应答具有重要作用。IL-2是免疫系统的可溶性激素样调节剂,是鉴定和表征的第一个白介素分子。IL-2对T细胞的生长、增殖和分化成“效应子”T细胞是必须的。IL-2是在免疫应答过程中由T细胞产生的,对于T细胞免疫记忆的发育具有重要作用,T细胞免疫记忆依赖于抗原选择性T细胞的数目和功能。成熟的T细胞又称为调节性T细胞,在胸腺T细胞的发展中,IL-2对T细胞的成熟是必须的。
1. Cantrell DA, Smith KA (June 1984). "The interleukin-2 T-cell system: a new cell growth model". Science 224 (4655): 1312–6.
2. Smith KA (May 1988). "Interleukin-2: inception, impact, and implications". Science 240 (4856): 1169–76.
3. Sakaguchi S, Sakaguchi N, Asano M, Itoh M, Toda M (August 1995). "Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains (CD25). Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases". J. Immunol. 155 (3): 1151–64.
4. ThorntonAM, Shevach EM (July 1998). "CD4+CD25+ immunoregulatory T cells suppress polyclonal T cell activation in vitro by inhibiting interleukin 2 production". J. Exp. Med. 188 (2): 287–96.
多肽H2N-Leu-Thr-Phe-Lys-Phe-Tyr-Met-Pro-Lys-Lys-Ala-COOH的合成步骤:
1、合成CTC树脂:称取0.68g CTC Resin(如初始取代度约为0.57mmol/g)和0.47mmol Fmoc-Ala-OH于反应器中,加入适量DCM溶解氨基酸(需要注意,此时CTC树脂体积会增大好几倍,避免DCM溶液过少),再加入1.16mmol DIPEA(Mw:129.1,d:0.740g/ml),反应2-3小时后,可不抽滤溶液,直接加入1ml的HPLC级甲醇,封端半小时。依次用DMF洗涤2次,甲醇洗涤1次,DCM洗涤一次,甲醇洗涤一次,DCM洗涤一次,DMF洗涤2次(这里使用甲醇和DCM交替洗涤,是为了更好地去除其他溶质,有利于后续反应)。得到 Fmoc-Ala-CTC Resin。结构图如下:
2、脱Fmoc:加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液,鼓氮气30分钟,然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Ala-CTC Resin 。(此步骤脱除Fmoc基团,茚三酮检测为蓝色,Pip为哌啶)。结构图如下:
3、缩合:取1.16mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH 氨基酸,加入到上述树脂里,加适当DMF溶解氨基酸,再依次加入2.33mmol DIPEA,1.1mmol HBTU。反应30分钟后,取小样洗涤,茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。得到Fmoc-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:树脂=3:6:2.85:1(摩尔比)。结构图如下:
4、依次循环步骤二、步骤三,依次得到
H2N-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
H2N-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
H2N-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
H2N-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
H2N-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Phe-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
H2N-Phe-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Phe-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
H2N-Lys(Boc)-Phe-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Phe-Lys(Boc)-Phe-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
H2N-Phe-Lys(Boc)-Phe-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
H2N-Thr(tBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
Fmoc-Leu-Thr(tBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin
以上中间结构,均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中,一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Leu-Thr(tBu)-Phe-Lys(Boc)-Phe-Tyr(tBu)-Met-Pro-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Ala-CTC Resin,结构如下:
5、切割:6倍树脂体积的切割液(或每1g树脂加8ml左右的切割液),摇床摇晃 2小时,过滤掉树脂,用冰无水乙醚沉淀滤液,并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次,最后将沉淀物放真空干燥釜中,常温干燥24小试,得到粗品H2N-Leu-Thr-Phe-Lys-Phe-Tyr-Met-Pro-Lys-Lys-Ala-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择:1)TFA:H2O=95%:5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
(前两种适合没有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。)
6、纯化冻干:使用液相色谱纯化,收集目标峰液体,进行冻干,获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结:
杭州专肽生物技术有限公司(ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com)主营定制多肽合成业务,提供各类长肽,短肽,环肽,提供各类修饰肽,如:荧光标记修饰(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基团修饰肽(叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素标记肽(N15、C13),订书肽(Stapled Peptide),脂肪酸修饰肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修饰肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),环肽(酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环),生物素标记肽,PEG修饰肽,甲基化修饰肽等。
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