Laminin (925-933) 是来源于层粘连蛋白受体结合的层粘连蛋白B1链的925-933残基中的肽段。
编号:181854
CAS号:110590-60-8/2828432-44-4
单字母:H2N-CDPGYIGSR-OH
Laminin (925-933) 是来源于层粘连蛋白受体结合的层粘连蛋白B1链的925-933残基中的肽段。
Laminin (925-933) is a peptide derived from residues 925-933 of the Laminin B1 chain that binds to the laminin receptor.
层粘连蛋白(925-933)是一种来源于层粘连蛋白B1链925-933残基的多肽(Cys-Asp-Pro-Gly-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg),与层粘连蛋白受体结合。
层粘连蛋白属于细胞外基质糖蛋白家族,是基底膜的主要非胶原成分。它们参与多种生物学过程,包括细胞粘着、分化、迁移、信号通路、突起生长和癌转移。层粘连蛋白由3条不同的链组成,分别为层粘连蛋白α、β和γ(以前分别称为A、B1和B2)。
层粘连蛋白β1链有7个结构上不同的区域,这是与其它β链异构体共有的部分。层粘连蛋白β1在大多数产生基底膜的组织中表达,是组成层粘连蛋白1的3条链之一。层粘连蛋白1是从Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)肿瘤中分离到的第一个层粘连蛋白。β1链中参与细胞附着、趋化作用和与层粘连蛋白受体结合的序列已被鉴定到,其具有抑制癌转移的能力。
参考文献:
1.Ikonen J, Pikkarainen T, Savolainen ER, Tryggvason K (Feb 1989). "A Hpa I polymorphism in the human laminin B1 chain gene on 7q22". Nucleic Acids Res 17 (1): 473.
2.Roche KB, Moore JW, Surana RB, Wilson BE (May 1989). "Aortic root dilatation associated with partial trisomy 7(q31.2----qter)". Pediatr Cardiol 10 (1): 53–5.
3.Bonneau D, Huret JL, Godeau G, Couet D, Putterman M, Tanzer J, Babin P, Larregue M (Sep 1991). "Recurrent ctb(7)(q31.3) and possible laminin involvement in a neonatal cutis laxa with a Marfan phenotype". Hum Genet 87 (3): 317–9.
Nelson J, et al. Murine epidermal growth factor (EGF) fragment (33-42) inhibits both EGF- and laminin-dependent endothelial cell motility and angiogenesis. Cancer Res. 1995 Sep 1;55(17):3772-6. : https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7543818
多肽H2N-Cys-Asp-Pro-Gly-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-COOH的合成步骤:
1、合成CTC树脂:称取2.25g CTC Resin(如初始取代度约为0.74mmol/g)和2.0mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH于反应器中,加入适量DCM溶解氨基酸(需要注意,此时CTC树脂体积会增大好几倍,避免DCM溶液过少),再加入5.0mmol DIPEA(Mw:129.1,d:0.740g/ml),反应2-3小时后,可不抽滤溶液,直接加入1ml的HPLC级甲醇,封端半小时。依次用DMF洗涤2次,甲醇洗涤1次,DCM洗涤一次,甲醇洗涤一次,DCM洗涤一次,DMF洗涤2次(这里使用甲醇和DCM交替洗涤,是为了更好地去除其他溶质,有利于后续反应)。得到 Fmoc-Arg(Pbf)-CTC Resin。结构图如下:
2、脱Fmoc:加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液,鼓氮气30分钟,然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Arg(Pbf)-CTC Resin 。(此步骤脱除Fmoc基团,茚三酮检测为蓝色,Pip为哌啶)。结构图如下:
3、缩合:取5.0mmol Fmoc-Ser(tBu)-OH 氨基酸,加入到上述树脂里,加适当DMF溶解氨基酸,再依次加入9.99mmol DIPEA,4.75mmol HBTU。反应30分钟后,取小样洗涤,茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。得到Fmoc-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:树脂=3:6:2.85:1(摩尔比)。结构图如下:
4、依次循环步骤二、步骤三,依次得到
H2N-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
H2N-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
Fmoc-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
H2N-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
H2N-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
H2N-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
Fmoc-Pro-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
H2N-Pro-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Pro-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Pro-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
Fmoc-Cys(Trt)-Asp(OtBu)-Pro-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin
以上中间结构,均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中,一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Cys(Trt)-Asp(OtBu)-Pro-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin,结构如下:
5、切割:6倍树脂体积的切割液(或每1g树脂加8ml左右的切割液),摇床摇晃 2小时,过滤掉树脂,用冰无水乙醚沉淀滤液,并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次,最后将沉淀物放真空干燥釜中,常温干燥24小试,得到粗品H2N-Cys-Asp-Pro-Gly-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择:1)TFA:H2O=95%:5%、TFA:H2O=97.5%:2.5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
(前两种适合没有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。)
6、纯化冻干:使用液相色谱纯化,收集目标峰液体,进行冻干,获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结:
杭州专肽生物技术有限公司(ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com)主营定制多肽合成业务,提供各类长肽,短肽,环肽,提供各类修饰肽,如:荧光标记修饰(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基团修饰肽(叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素标记肽(N15、C13),订书肽(Stapled Peptide),脂肪酸修饰肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修饰肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),环肽(酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环),生物素标记肽,PEG修饰肽,甲基化修饰肽
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