α-内啡肽乙酸酯是前阿片黑素家族的一种相关肽，具有独特的生物活性。α-内啡肽是一种与阿片受体结合的内源性神经肽。
编号：197772
CAS号：59004-96-5/73538-02-0
单字母：H2N-YGGFMTSEKSQTPLVT-OH
α-内啡肽乙酸酯是前阿片黑素家族的一种相关肽，具有独特的生物活性。α-内啡肽是一种与阿片受体结合的内源性神经肽。
alpha-Endorphin acetate is a related peptide of the pro-opiomelanocortin family with characteristic biological activities. α-Endorphin is an endogenous neuropeptide that binds to opioid receptors.
背景
内啡肽（Endorphins）是可以充当神经递质的内源性阿片肽(1)。在锻炼、兴奋、疼痛、刺激性食物、爱和性高潮的过程中，内啡肽由脊椎动物下丘脑和脑垂体产生。类似于阿片类药物，它们可以使人产生镇痛和幸福的感觉。内啡肽具有一定的药理活性，类似于皮质类固醇类，并非特定的化学制剂。它由两部分组成：endo-和-orphin，代表了内源性和吗啡(2)， β-endorphin主要有两种产生方式：从脑垂体释放到血液和从下丘脑神经元释放进入脊髓和脑。由于存在血脑屏障，释放进入血液的β-endorphin不能大量进入脑中，虽然可以在血液测定β内啡肽，但其生理意义目前尚不清楚。β-endorphin是促肾上腺皮质激素（ACTH）的前体物质POMC的裂解产物。主要通过作用于脑和脊髓发挥其行为效应，据推测，β-endorphin主要来源于下丘脑神经元。在促肾上腺皮质激素（ACTH）水平升高的情况下（例如，库欣综合征），β-endorphin的水平也略有增加(3)。
参考文献：
1. Oswald Steward: Functional neuroscience (2000), page 116.
2. Goldstein A, Lowery PJ (September 1975). "Effect of the opiate antagonist naloxone on body temperature in rats". Life Sciences 17 (6): 927–31.
3. Simantov R, Snyder S (1976). "Morphine-like peptides in mammalian brain: isolation, structure elucidation, and interactions with the opiate receptor". Proc Natl Acad Sci USA 73 (7): 2515–9.
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1016/j.chroma.2006.01.102 | Measurement of neuropeptides in clinical samples using chip-based immunoaffinity capillary electrophoresis | 下载 |
多肽H2N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-COOH的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取1.58g CTC Resin（如初始取代度约为1.11mmol/g）和2.1mmol Fmoc-Thr(tBu)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入5.26mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Thr(tBu)-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Thr(tBu)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取5.26mmol Fmoc-Val-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入10.52mmol DIPEA，5.0mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Val-Thr(tBu)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Met-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Met-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Phe-Met-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Phe-Met-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Phe-Met-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Gly-Phe-Met-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Gly-Phe-Met-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
H2N-Gly-Gly-Phe-Met-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Gly-Gly-Phe-Met-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Tyr(tBu)-Gly-Gly-Phe-Met-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Pro-Leu-Val-Thr(tBu)-CTC Resin，结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。
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